摘要：目的:構(gòu)建RNR3啟動子調(diào)控的紅綠熒光蛋白雙信號發(fā)光酵母細(xì)胞,用于快速篩選化學(xué)誘變原。方法:用PCR方法YIPlac204TC-NLS-DsRed-Express-2擴增DsRed-Express-2紅色熒光蛋白,將其插入到pGPD載體,構(gòu)建成GPD啟動子驅(qū)動的紅色熒光蛋白酵母報告載體(pGPD-DsRed-Express2),用醋酸鋰方法將其轉(zhuǎn)化于RNR3啟動子調(diào)控的綠色熒光蛋白(yEGFP)發(fā)光酵母細(xì)胞(W303-1A/RNR3-yEGFP),從而構(gòu)建成紅、綠熒光蛋白雙信發(fā)光酵母細(xì)胞。紅色熒光蛋白(DsRed-Express-2)信號可用于校正細(xì)胞數(shù)和狀態(tài)不同對yEGFP發(fā)光的影響。用不同誘變原分別作用于該發(fā)光酵母細(xì)胞,于第0、4、8、12、16和20小時,用黑色96孔酶標(biāo)板分別測紅、綠熒光蛋白的發(fā)光強度,用相對熒光強度(yEGFP/DsRed-Express2)描述誘變原的劑量效應(yīng)關(guān)系。結(jié)果:在與DNA發(fā)生結(jié)合的化合物中,放線菌素D和溴乙錠均呈陰性;在與DNA發(fā)生烷基化的化合物中,甲磺酸甲脂(MMS)和瘤可寧呈陽性結(jié)果,而絲裂霉素C呈陰性結(jié)果;在使DNA發(fā)生斷裂的誘變原中,順鉑、博來霉素和福來霉素呈陰性,而4-硝基-N-氧化喹啉(4-NQO)呈陽性結(jié)果;在抑制DNA合成酶或拓?fù)洚悩?gòu)酶的誘變原中,5-氟尿嘧啶呈陽性結(jié)果,而羥基脲、喜樹堿和阿非迪霉素均呈陰性結(jié)果;非基因毒性化合物秋水仙堿、刀豆氨酸和四環(huán)素均呈陰性。結(jié)論:該重組發(fā)光酵母細(xì)胞(W303-1A/yEGFP/DsRed-Express2)可作為傳統(tǒng)致突變評價方法的補充,具有快速、方便和高通量特點。