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利用GUS基因的瞬時(shí)表達(dá)優(yōu)化大豆根癌農(nóng)桿菌介導(dǎo)的遺傳轉(zhuǎn)化

楊明明; 高海京; 馬嘯燕; 孫英楠; 邵宇鵬; 包格格; 李文濱; 王志坤 東北農(nóng)業(yè)大學(xué)大豆生物學(xué)教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室/農(nóng)業(yè)部東北大豆生物學(xué)與遺傳育種重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室; 黑龍江哈爾濱150030
  • 根癌農(nóng)桿菌
  • 大豆遺傳轉(zhuǎn)化
  • 轉(zhuǎn)化率
  • gus基因瞬時(shí)表達(dá)

摘要:高轉(zhuǎn)化效率是分子育種的重要前提,根癌農(nóng)桿菌介導(dǎo)的遺傳轉(zhuǎn)化由于其有較高的遺傳效率和較低的拷貝數(shù)成為目前優(yōu)選方法。為優(yōu)化大豆遺傳轉(zhuǎn)化體系,以本實(shí)驗(yàn)室已有轉(zhuǎn)化體系為基礎(chǔ),利用pCAMBIA3301中35S∶GUS基因瞬時(shí)表達(dá)體系,從萌發(fā)時(shí)間、切豆方法、侵染時(shí)間、共培養(yǎng)方式以及共培養(yǎng)時(shí)間等方面對(duì)東農(nóng)47、墾農(nóng)18和B12088大豆栽培品種的遺傳轉(zhuǎn)化體系進(jìn)行優(yōu)化。結(jié)果表明:東農(nóng)47萌發(fā)1d,侵染30 min;墾農(nóng)18和B12088萌發(fā)12h,侵染30min,GUS基因瞬時(shí)表達(dá)率最高。在其它的處理上,3個(gè)品種表現(xiàn)結(jié)果一致,即蘸取菌液切豆,共培養(yǎng)中子葉傷口朝下擺放,黑暗條件下共培養(yǎng)3~5 d,GUS基因瞬時(shí)表達(dá)最高。3個(gè)品種在最適條件下,GUS染色效率均達(dá)到90%以上,墾農(nóng)18遺傳轉(zhuǎn)化效率較高。本研究為大豆農(nóng)桿菌介導(dǎo)子葉節(jié)轉(zhuǎn)化方法提供了一個(gè)改進(jìn)的方案,并且為拓寬可利用于大豆遺傳轉(zhuǎn)化的種質(zhì)資源奠定基礎(chǔ)。

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大豆科學(xué)

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