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Ni-NTA蛋白芯片技術(shù)檢測(cè)間日瘧原蟲(chóng)感染的體液免疫應(yīng)答

陳軍虎; 王越; 坪井敬文; 韓銀澤 中國(guó)疾病預(yù)防控制中心寄生蟲(chóng)病預(yù)防控制所; 上海200025; 200-701春川; 韓國(guó)國(guó)立江原大學(xué)醫(yī)學(xué)院寄生蟲(chóng)學(xué)研究室; 浙江省醫(yī)學(xué)科學(xué)院寄生蟲(chóng)病研究所; 杭州310013; 790-8577松山; 日本愛(ài)媛大學(xué)無(wú)細(xì)胞技術(shù)研究中心和風(fēng)險(xiǎn)事業(yè)實(shí)驗(yàn)室
  • 間日瘧原蟲(chóng)
  • 體液免疫
  • 蛋白芯片

摘要:目的建立檢測(cè)間日瘧感染的Ni—NTA蛋白芯片技術(shù)。方法采用無(wú)細(xì)胞蛋白合成體系表達(dá)間日瘧原蟲(chóng)重組蛋白,建立原位純化重組蛋白和檢測(cè)間t3瘧原蟲(chóng)感染患者血清中抗體反應(yīng)的M—NTA蛋白芯片技術(shù)。并對(duì)3個(gè)裂殖子表面蛋白(merozoitesurfaceproteins,MSPs)MSP1-42、MSP8和MSP10的免疫應(yīng)答進(jìn)行分析。結(jié)果應(yīng)用Ni—NTA蛋白芯片技術(shù)檢測(cè)間日瘧原蟲(chóng)感染患者血清抗體,鑒定出具有免疫原性的15個(gè)間日瘧原蟲(chóng)蛋白,主要包括10個(gè)MSPs、2個(gè)Cys6蛋白以及其他3個(gè)未知蛋白,結(jié)果與以往報(bào)道的抗體芯片類(lèi)似。MSP1-42、MSP8和MSP10依次識(shí)別出100.0%(20/20)、90.0%(18/20)和70.0%(14/20)的間日瘧原蟲(chóng)感染患者血清,特異性均為100%(10/10),且曲線(xiàn)下面積(area under the curve,AUC)達(dá)到0.87—1.00。結(jié)論成功建立了檢測(cè)間日瘧原蟲(chóng)感染的Ni—NTA蛋白芯片技術(shù)。該方法有助于從間日瘧原蟲(chóng)基因組中快速篩選鑒定具有免疫原性的蛋白以及應(yīng)用于功能蛋白質(zhì)組學(xué)研究。

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