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多粘類芽孢桿菌纖維素酶基因bglA,bglB和EG在乳酸菌中的分泌表達(dá)

劉原子; 王艷; 萬(wàn)學(xué)瑞; 王川; 吳潤(rùn); 劉崗; 吳自祥 甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)院; 甘肅蘭州730070
  • 乳酸菌
  • 纖維素酶
  • 多粘類芽孢桿菌
  • 分泌型表達(dá)
  • 酶活測(cè)定

摘要:通過(guò)PCR擴(kuò)增獲得乳酸菌(Lactobacterium lactis MG1363)的usp45基因,將其克隆到乳酸菌(L.lactis)食品級(jí)表達(dá)載體pNZ8048中獲得分泌型表達(dá)載體pNZ-X;然后將多粘類芽孢桿菌(Bacillus polymyxa)β-葡萄糖苷酶基因bglA、bglB及內(nèi)切β-葡聚糖酶基因EG分別連接載體pNZ-X,獲得重組質(zhì)粒pNZ-X::bglA,pNZ-X::bglB和pNZ-X::EG,將3個(gè)質(zhì)粒電轉(zhuǎn)導(dǎo)入L.lactis NZ9000,得到重組乳酸菌L.lactis NZ9000/pNZ-X::bglA、L.lactis NZ9000/pNZ-X::bglB和L.lactis NZ9000/pNZ-X::EG,并測(cè)定分泌性表達(dá)的BglA,BglB和EG的酶活性。結(jié)果顯示:3個(gè)酶大小均在50kU;DNS法測(cè)定酶活力表明重組菌株的酶活力顯著低于多粘類芽孢桿菌的酶活力(P〈0.05),但具有一定的活性;剛果紅染色結(jié)果也表明重組乳酸菌分泌產(chǎn)生的酶可產(chǎn)生明顯的水解圈。試驗(yàn)為重組纖維素酶在食品級(jí)菌株中重組表達(dá)提供了一種可行的方案,為秸稈的降解研究奠定了基礎(chǔ)。

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