摘要：為構(gòu)建有效的地被菊再生和遺傳轉(zhuǎn)化體系,本研究以匍匐型地被菊雨花落英葉片為外植體,研究不同苗齡和激素配比對葉盤再生的影響;通過農(nóng)桿菌介導(dǎo)法將外源基因?qū)胍吧椭仓曛?研究預(yù)培養(yǎng)、延遲培養(yǎng)、抗生素濃度等遺傳轉(zhuǎn)化條件對轉(zhuǎn)化效率的影響。結(jié)果表明,雨花落英葉盤轉(zhuǎn)基因最適再生條件為,以苗齡為30 d的組培苗幼嫩葉片為外植體,設(shè)置再生培養(yǎng)基配方為MS+6-BA 1. 5 mg·L-1+NAA 0. 8 mg·L-1,此時(shí)再生率高達(dá)91. 11%,平均芽數(shù)為5. 90;最優(yōu)遺傳轉(zhuǎn)化組合為預(yù)培養(yǎng)2 d,侵染5min,共培養(yǎng)2 d,延遲培養(yǎng)5 d,之后進(jìn)行選擇培養(yǎng)。羧芐青霉素在延遲培養(yǎng)階段最適抑菌濃度為400mg·L-1;潮霉素葉盤篩選的最適選擇壓為8~10 mg·L-1,生根篩選最適濃度為11 mg·L-1;培養(yǎng)后期加入6-KT可以有效提高抗性芽的再生率;調(diào)節(jié)6-BA濃度為1. 0 mg·L-1,蔗糖濃度為40 g·L-1,可以將得到的玻璃化苗轉(zhuǎn)化為正常苗。分子鑒定結(jié)果表明,15株抗性苗中有10株陽性苗,陽性苗概率為67%;與野生型植株相比,9個(gè)株系的CmERF12基因均受到了明顯的抑制表達(dá)。本研究建立了地被菊雨花落英再生和遺傳轉(zhuǎn)化體系,為進(jìn)一步進(jìn)行基因功能研究和遺傳改良奠定了一定的理論基礎(chǔ)。