摘要：鹵代烷烴脫鹵酶(HLD)是一類能降解鹵代脂肪化合物的酶,為今后將藻類HLD用 于環(huán)境中鹵素化合物的降解提供資料,本實驗利用生物信息學、熒光定量PCR和pET28a 表達系統(tǒng)對大型紅藻龍須菜中HLD的酶學特性、轉(zhuǎn)錄表達和原核表達進行了研究。生物 信息學分析結(jié)果顯示,龍須菜中HLD基因(記為GlHLD)開放閱讀框長969 bp,理論分子量 約為36.33 ku,等電點約為5.53;該GlHLD序列與繩狀龍須菜的一條HLD序列(PXF45553.1) 完全一致,與繩狀龍須菜和皺波角叉菜等紅藻優(yōu)先聚類。熒光定量PCR結(jié)果表明,高溫 下底物1,2-二氯乙烷和植物激素水楊酸可促進GlHLD基因的表達,其表達量分別為常溫 組的3.64、2.64和2.43倍。GlHLD與pET28a質(zhì)粒構(gòu)建的重組載體在大腸桿菌BL21(DE3)中 成功表達出具有脫鹵酶活性的蛋白;該蛋白的最佳誘導條件為16 °C、0.1 mmol/L IPTG誘 導12 h,最后用鎳柱對GlHLD蛋白進行了初步純化。本研究為進一步了解藻類HLD家族 及獲得高純度HLD酶奠定了基礎(chǔ)。