摘要：目的對(duì)重組突變巴曲酶進(jìn)行酶動(dòng)力學(xué)初步研究,并建立一種蛇毒類(lèi)凝血酶活性測(cè)定方法。方法使用可控溫(37℃)紫外分光光度計(jì),采用酶動(dòng)力學(xué)測(cè)定法,測(cè)定重組突變巴曲酶的米氏常數(shù),優(yōu)化活性測(cè)定方法的反應(yīng)時(shí)間和線(xiàn)性范圍,驗(yàn)證此方法精密度,并用發(fā)色底物法與血漿凝集法同時(shí)測(cè)定不同蛇種來(lái)源的類(lèi)凝血酶活性。結(jié)果重組突變巴曲酶的米氏常數(shù)(37℃)Km值為256.28μmol/L、Vm值為0.005077μmol/min。該法呈現(xiàn)相應(yīng)的劑量關(guān)系曲線(xiàn),反應(yīng)時(shí)間優(yōu)選為0~20min,線(xiàn)性范圍優(yōu)選為1~16.8nmol/L,擬合度R2≥0.99,方法精密度的變異系數(shù)≤5.0%。兩種不同方法測(cè)定不同蛇種來(lái)源類(lèi)凝血酶的活性單位比例范圍為3.3~3.7(發(fā)色底物法/血漿凝集法),比例關(guān)系一致。結(jié)論建立的蛇毒類(lèi)凝血酶活性測(cè)定方法擬合度優(yōu),精密度高,可測(cè)定不同來(lái)源的類(lèi)凝血酶活性,并可替代傳統(tǒng)血漿凝集活性測(cè)定法。