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黑曲霉低聚葡萄糖氧化酶的分子克隆與生化特征

苑馨瑤; 田康明; 金鵬; 程磊; 王正祥 天津科技大學(xué)化工與材料學(xué)院; 天津300457; 天津科技大學(xué)生物工程學(xué)院; 天津300457
  • 低聚葡萄糖氧化酶
  • 黑曲霉
  • 克隆表達(dá)
  • 酶學(xué)性質(zhì)

摘要:低聚葡萄糖氧化酶能夠氧化低聚葡萄糖末端殘基生成相應(yīng)的低聚糖酸,在低聚糖酸的制備、食品、化工等方面具有潛在的應(yīng)用價(jià)值。從黑曲霉基因組中發(fā)現(xiàn)1個(gè)疑似編碼低聚葡萄糖氧化酶開(kāi)放讀框,共編碼473個(gè)氨基酸序列,包含2個(gè)保守結(jié)構(gòu)域(FAD結(jié)合域和黃素結(jié)構(gòu)域)和4個(gè)活性位點(diǎn)(His80、Cys141、Asp377和Try428);在畢赤酵母中表達(dá)的重組酶蛋白大小為61 kDa,比酶活0.33 U/mg。重組酶的最適作用溫度和pH值分別為75℃和9.0;在55~85℃和pH 5.0~9.0范圍內(nèi)孵育4 h,仍能保持70%以上的酶活;Mn^2+和Fe^3+分別對(duì)酶活具有最強(qiáng)的激活和抑制作用。該酶的K m和V max為0.48 mmol/L和2.22μmol/(L·min),對(duì)麥芽三糖、麥芽四糖和麥芽五糖具有相對(duì)較高酶活。

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食品與發(fā)酵工業(yè)

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