摘要：目的:建立可用于評價動物源性生物材料細胞免疫的體外淋巴細胞增殖試驗方法。方法:采用C57小鼠脾臟淋巴細胞,通過淋巴細胞數量、陽性對照劑(刀豆蛋白A,Con A)濃度和培養(yǎng)時間等條件篩選,用CCK8試劑檢測細胞增殖率,初步優(yōu)化體外淋巴細胞增殖試驗方法。采用牛心包組織(原材料)的浸提液和勻漿液,作為抗原特異性的陽性對照組考察樣品前處理方式對試驗體系的影響,并用流式細胞儀分析增殖后的淋巴細胞亞型百分比,考察樣品制備方式對淋巴細胞亞型增殖影響的差異。結果:本試驗中小鼠脾淋巴細胞體外增殖試驗條件確定為每孔接種6×105個淋巴細胞,陽性對照孔Con A濃度為2.5μg·mL-1,培養(yǎng)時間為3 d。牛心包浸提液和勻漿液的淋巴細胞增殖率均約為細胞對照組的2倍,兩者的淋巴細胞亞型百分比變化不同于Con A組,未出現T細胞、CD4 T細胞、CD8 T細胞百分比的增加。浸提液組與勻漿液組的活化NK細胞和NKT細胞百分比與對照組相比均明顯升高,但浸提液組的升高幅度數倍高于勻漿液組,且僅浸提液組NK細胞百分比與對照相比出現了明顯倍增。結論:本研究建立了以動物組織(原材料)為抗原特異性陽性對照的體外淋巴細胞增殖試驗方法。動物組織(原材料)浸提和勻漿樣品均可以產生淋巴細胞增殖陽性結果,其促進淋巴細胞增殖的機理(亞型分類)不同于Con A等有絲分裂原,提示使用作為動物組織(原材料)陽性對照更能反映試驗體系的敏感性。