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不同種屬小鼠用于淋巴細胞增殖試驗的比較研究

陳亮; 穆鈺峰; 邵安良; 魏麗娜; 屈樹新; 徐麗明 中國食品藥品檢定研究院; 北京102629; 西南交通大學材料科學與工程學院; 成都611756
  • 淋巴細胞增殖試驗
  • gal抗原缺失小鼠
  • ggta1基因敲除
  • 動物源性生物材料

摘要:目的:對使用不同種屬小鼠進行脾淋巴細胞增殖試驗的適宜性和可比性進行研究。方法:分別獲取BALB/c小鼠、野生型C57BL/6(簡稱C57)小鼠、Gal抗原缺失(C57背景,GGTA1基因被敲除)小鼠的脾淋巴細胞,在確定脾淋巴細胞數(shù)量與CCK8吸收度的線性范圍后,設(shè)立陽性對照組(刀豆蛋白A,Con A)、不同稀釋度的動物原材料勻漿液和脫細胞生物材料勻漿液等試驗組,使用CCK8檢測淋巴細胞增殖,流式細胞術(shù)測定淋巴細胞亞型百分比,以確定BALB/c小鼠、野生型C57小鼠和Gal抗原缺失小鼠在體外淋巴細胞增殖試驗的適宜性和可比性。結(jié)果:C57小鼠脾淋巴細胞數(shù)量和CCK8的吸收度的線性范圍要明顯大于BALB/c小鼠,而BALB/c小鼠線性曲線的斜率明顯大于C57小鼠。從CCK8檢測的淋巴細胞增殖結(jié)果看,BALB/c小鼠與C57小鼠相比,2.5μg·mL-1的Con A對2種小鼠脾淋巴細胞增殖均出現(xiàn)明顯刺激作用;牛跟腱(含低水平的Gal抗原)勻漿液對2種小鼠脾淋巴細胞增殖均顯示刺激作用,并顯示出量效關(guān)系;不同稀釋度的膠原海綿(牛跟腱來源)勻漿液對2種小鼠脾淋巴細胞增殖均未顯示刺激作用,表現(xiàn)了一致的結(jié)果,說明沒有淋巴細胞促增殖作用。另外,來源于Gal抗原缺失小鼠與野生型C57小鼠的脾臟淋巴細胞對Con A、牛心包(含有高水平的Gal抗原)勻漿液均表現(xiàn)出強的增殖反應(yīng)和相似的反應(yīng)強度。流式細胞術(shù)檢測結(jié)果顯示牛心包勻漿原液組在Gal抗原缺失小鼠僅顯示活化B細胞百分比與對照組相比有統(tǒng)計學顯著性差異,而在野生型C57小鼠組其活化B細胞、活化T細胞、活化NK細胞、NKT細胞、CD4 T細胞百分比與對照組相比均有統(tǒng)計學顯著性差異。結(jié)論:CCK8檢測的各試驗組淋巴細胞增殖率結(jié)果在C57小鼠與BALB/c小鼠、Gal抗原缺失小鼠與野生型C57小鼠間具有可比性,表明這些種屬的小鼠均可用于體外淋巴細胞增殖試驗。

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