摘要：目的構(gòu)建pEGFP—N1－CKB真核表達(dá)載體并將其穩(wěn)定轉(zhuǎn)染到肺鱗癌細(xì)胞NCI—H520中，建立穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的NCI—H520細(xì)胞系，為后續(xù)研究奠定基礎(chǔ)。方法以人CKBcDNA文庫為模板，用PCR擴(kuò)增人CKBcDNA的編碼區(qū)，并將擴(kuò)增的cDN段與載體連接后亞克隆到真核表達(dá)載體pEGFP-N1中。重組子經(jīng)酶切分析及測序鑒定后，用脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染技術(shù)將其導(dǎo)入到人肺鱗癌細(xì)胞系NCI—H520，經(jīng)G418篩選并建立穩(wěn)定的轉(zhuǎn)染細(xì)胞株，應(yīng)用Westernblot檢測轉(zhuǎn)染前后該細(xì)胞株CKB基因的表達(dá)。結(jié)果pEGFP—N1－CKB經(jīng)酶切鑒定及DNA測序證實(shí)序列完全正確，真核表達(dá)載體構(gòu)建成功；經(jīng)Westernblot檢測，重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染株中CKB基因的表達(dá)水平明顯高于對照組，證實(shí)CKB基因已穩(wěn)定轉(zhuǎn)染到NCI-H520細(xì)胞中并得到表達(dá)。結(jié)論成功構(gòu)建了pEGFP—N1－CKB真核表達(dá)質(zhì)粒，建立了穩(wěn)定表達(dá)CKB的NCI-H520細(xì)胞系，為進(jìn)一步研究CKB的生物學(xué)功能奠定了基礎(chǔ)。